PCR (Polymerase Chain Reaction- Polimeraz Zincir Reaksiyonu) DNA içindeki özgün bir bölgeyi enzimatik olarak çoğaltmak için uygulanan tepkimelere verilen genel bir isimdir. PCR yöntemi kısaca DNA replikasyonunun belirli sayıda sürekli taklit edilmesi ya da tekrar edilmesi olarak ifade edilebilir.
PCR bir tanı testi olarak bilinmektedir ve koronavirüste de virüse ait RNA'yı göstermektedir. Yani PCR test koronavirüs sürecinde, vücuttaki virüsün kimliğini göstermek için yapılan bir testtir. Farklı hastalıklar için de kullanılan PCR, vücuttaki çok az sayıdaki mikrobu bile tespit edebilmektedir.
Polimeraz Zincir Reaksiyonu, DNA'nın belirli bir bölgesinin tüp içinde çoğaltılması işlemidir. Bu teknik ile DNA molekülünün milyonlarca hatta milyarlarca kopyasını yapmak mümkündür. PCR, 1985 yılında Cetus adlı biyoteknoloji firmasında çalışan Kary Mullis adlı araştırmacı tarafından bulunmuştur.
Polimeraz Zincir Tepkimesi ya da PCR, belirli bir DNA bölgesinin canlı olmayan bir ortamda, bir başka deyişle bir organizmanın içi yerine bir deney tüpünün içinde, çok sayıda kopyasının oluşturulması yöntemine verilen isimdir.
Enfeksiyon hastalıklarında patojenlerin saptanmasında rutin olarak uygulanan PCR çeşitleri bulunmaktadır. Bunlar Nested-PCR, Real- Time PCR, Multipleks PCR, Kantitatif PCR, Touch Down PCR, Solid Phase PCR, ve Revers Transkripsiyon PCR'dır.
İlgili 29 soru bulundu
PCR tekniği bozundurma (denaturation), bağlanma (annealing) ve uzama (elongation) olmak üzere 3 aşamadan oluşmaktadır. Bozundurma aşamasında belirli bir süre (15 sn. – 10 dk.) yüksek sıcaklığa (94-96 °C) maruz bırakılan DNA zinciri iki parçaya ayrılmaktadır.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), in vitro koşullarında DNA dizilerinin çoğaltılması esasına dayanmaktadır. PCR; Basit, spesifik ve hassas bir tekniktir. Üç basamaktan (denaturation, annealing, primer extension) oluşan işlem, bir PCR devrini temsil eder.
Kaynaksız içerik itiraz konusu olabilir ve kaldırılabilir. Polimeraz zincirleme tepkimesi (polymerase chain reaction - PCR), DNA içerisinde yer alan, dizisi bilinen iki segment arasındaki özgün bir bölgeyi enzimatik olarak çoğaltmak için uygulanan tepkimelere verilen ortak bir isimdir.
PCR'da kullanılan temel bileşenler hedef DNA veya RNA (templeyt), taq DNA polime- raz enzimi, primerler, deoksinükleotitler, tam- pon sıvı, pH, Mg+2 iyonlarıdır5,45.
DNA polimeraz, DNA replikasyonunu sağlayan bir enzimdir. Bu enzimler bir DNA ipliğini kalıp olarak kullanır, onu okuyup, onun boyunca deoksiribonükleotitlerin polimerizasyonunu katalizler. Yeni polimerleşmiş molekül kalıp ipliği tamamlayıcıdır, ve kalıp ipliğin eski eşi ile aynı yapıya sahiptir.
2) ANCHORED (demirlenmiş) PCR : Bu PCR tipinde çoğaltılacak olan DNA'nın sadece bir bölgesinin yani bir primer bölgesinin bilindiiği durumlarda uygulanır. Bu amaçla çoğaltılacak DNA bilinen bir diziye bağlanır ve bu bilinen dizi 2. primer bölgesi olarak kullanılır. !!! Tek primer biliniyor.
Bir polimeraz (EC 2.7.7.6/7/19/48/49), merkezî işlevi RNA ve DNA gibi nükleik asit polimerleri ile ilgili olan bir enzimdir. Bir polimerazın esas fonksiyonu, mevcut bir DNA veya RNA kalıbı kullanarak , ikileşme veya transkripsiyon süreci içinde, yeni bir DNA veya RNA'nın polimerizasyonudur.
Geleneksel PCR'dan farklı olarak, RT-PCR'da, DNA miktarı PCR ile çoğaltılan moleküllerin sayısıyla doğru orantılı olarak artan floresan sinyali veren floresan boyalar aracılığıyla her döngüden sonra ölçülür.
PCR yapabilmek için Termal Cycle (Isı Döngü) cihazı kullanılır. Bu cihazın mantığı; İçerisine mikrotüpler ile konulan (DNA+enzim+primer gibi) PCR ürünlerinin değişik ısılara maruz bırakılarak DNA'daki çoğaltılmak istenen bölgeler ile primerlerdeki bölgelerin bağlanması ve çoğalmasını sağlamaktır.
Test sonucunun negatif olarak değerlendirilmesi, kişinin corona virüs taşımadığı anlamına gelmektedir.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), DNA replikasyonunun taklit edilmesi olarak kısaca tanımlanır. Bu işlemin tüp içerisinde hızlı bir şekilde ard arda olarak tekrarlanmasıyla başlangıç DNA miktarının milyon kat artırılması söz konusudur. PCR işleminde hedef DNA'nın çoğaltılması 20-40 döngü arasında gerçekleşir.
Bu çözeltiye uç pH değerleri uygulanırsa veya sıcaklık 800Cin üstüne çıkarılırsa DNA fiziksel değişime uğrar ve yoğunluk hızla azalır. Bunun sonunda zincirler birbirinden ayrılır ve sarmal yapı bozulur. Bu olaya denatürasyon(DNA'nın erimesi)denir.
Çok sayıda DNA molekülünden söz edilirken, ergime sıcaklığı (Tm), DNA iplikçiklerinin yarısının ikili sarmal, yarısının ise rastgele sarım (İng. random coil) hâlinde olduğu sıcaklıktır. Ergime sıcaklığı, molekülün uzunluğuna ve onun nükleotit bileşimine bağlıdır.
Gerçek zamanlı PCR hem kalitatif hem de kantitatif analiz için kullanılabilir; uygulamanız için en iyi yöntemi seçmek, bu teknoloji hakkında geniş bilgi gerektirir.
Yapılış şekline, laboratuvar koşullarına ve yoğunluğa bağlı olarak, klasik COVID-19 PCR testi genellikle 2 – 4 saat arasında sonuç verir. Test sonucunun pozitif çıkması durumunda, kesin tanı konmadan önce testin 3 kez tekrarlanması gerekebilir. Bu yüzden, testin kesin sonuçlanması 1 günü bulabilir.
DNA testinde; hedeflenen belirli gen dizilimlerinin, incelenen materyale ait DNA diziliminde var olup olmadığı belirlenir. Bu anlamda spesifik bir hastalıkla ilişkisi olduğu yapılan bilimsel çalışmalarla tespit edilmiş genetik dizilimlerin incelenmesi ile hastalık tanısı hakkında önemli bilgiler elde edilebilir.
Koronavirüsün yanında vücuttaki diğer birçok mikrop, hastalık ve virüs türü de PCR testi sayesinde ayırt edilebilmektedir. PCR testinin yaygın olarak kullanıldığı alanlara HIV ve Hepatit B gibi hastalıkların teşhisi, DNA analizi, kanser hücrelerinin tespiti ve babalık testi örnek olarak verilebilir.
Primerler: kopyalamak istediğiniz DNA bölümünün her iki tarafına bağlanacak şekilde tasarlanmış, PCR reaksiyonunu başlatmak için kullanılan kısa DNA dizileri. dNTP'ler: (DNA nükleotid bazları), DNA bazları (A, C, G ve T) DNA'nın yapı taşlarıdır ve yeni DNA zincirini oluşturmak için gereklidir.
Taq polimeraz, Thermus aquaticus bakterisinden elde edilen DNA polimeraz enzimidir. Thermus aquaticus, termofilik bir bakteridir. Kaplıca ya da jeotermal bölgelerde yaşar. Taq polimeraz enzimi, PCR'da kullanılan, yüksek sıcaklıklara (94 °C) dayanabilen bir enzimdir.
Benzer sorularSıkça sorulan sorular
DuyuruReklam alanı
Popüler SorularSıkça sorulan sorular
© 2009-2024 Usta Yemek Tarifleri